rtPCR 也就是逆转录聚合酶链式反应，核心作用是以 RNA 作为初始模板，先通过逆转录酶把 RNA 反转录成 cDNA，再对 cDNA 做 PCR 扩增，实现 RNA 的定性或者定量检测，它主要用来检测原本是 RNA 基因组的病原体，还可以分析基因表达水平，很多人会把 rtPCR 和 qPCR 弄混，rtPCR 重点是逆转录这个步骤，qPCR 是实时荧光定量，日常说的荧光定量 rtPCR，就是把逆转录和实时荧光定量结合在一起，也就是 RT qPCR，这项技术灵敏度很高，可以微量识别样本里面的 RNA，是临床检验科研领域非常重要的分子生物学手段，理解 rtPCR 的作用，就要分清它适用 RNA 检测场景，和普通 PCR 只检测 DNA 的本质差别，普通 PCR 无法直接扩增 RNA，所以需要 rtPCR 这套流程完成 RNA 扩增检测。

核心原理简要说明

第一步 逆转录反应，在逆转录酶作用下，RNA 模板合成互补 DNA 也就是 cDNA

第二步 PCR 扩增，以 cDNA 作为模板，经过变性退火延伸循环，不断复制目标片段

第三步 结果读取，如果是定性 rtPCR，最终通过电泳查看有没有目标条带，如果是定量类型，可以实时监测荧光信号，计算原始样本里面 RNA 的初始拷贝数

rtPCR 主要应用作用分类

详细作用解读

1 RNA 病毒检测

像冠状病毒 流感病毒这类遗传物质是 RNA，普通 PCR 不能直接识别，必须使用 rtPCR，把病毒 RNA 转成 cDNA 之后扩增，判断样本是否携带病毒核酸，这是临床最熟知的用途，属于病原核酸确诊试验。

2 基因表达定量研究

细胞里面 mRNA 代表基因正在表达，通过 rtPCR 定量，可以对比实验组和对照组 mRNA 含量，判断药物刺激 环境处理之后，目标基因表达是上调还是下调，是分子生物学科研基础实验。

3 变异与转录本分析

可以识别不同 mRNA 转录本，研究基因可变剪接，检测 RNA 层面的异常，弥补 DNA 层面检测不能反映转录活性的短板。

rtPCR 和普通 PCR 对比

实验操作步骤

第一步 样本采集，保存 RNA 样本，RNA 非常容易降解，全程低温操作

第二步 提取纯化样本总 RNA

第三步 配制逆转录体系，完成逆转录生成 cDNA

第四步 配制 PCR 反应体系，加入引物酶缓冲液 dNTP

第五步 设置 PCR 程序，启动扩增循环

第六步 上机检测，读取定性或者定量结果

第七步 数据分析，判读阴性阳性或者计算相对表达量

技术特点与局限

优点

灵敏度高，微量 RNA 也可以检出，特异性强，引物靶向特定序列，实验成熟，试剂标准化

局限

RNA 容易降解，对样本保存要求高，容易出现交叉污染，假阳性，只能检测目标靶点，不能覆盖未知突变，实验结果需要结合临床综合判断，不能单独作为确诊唯一依据

综合总结，rtPCR 的核心作用就是针对 RNA 模板，先逆转录再扩增，主要用于 RNA 病毒核酸检测还有基因表达定量分析，它解决普通 PCR 不能直接检测 RNA 的短板，是临床检验和分子科研的经典技术。

【常见问题】

问题 1 rtPCR 的作用是不是只能查病毒

回答 1 rtPCR 的作用不只是查病毒，rtPCR 除了 RNA 病毒检测，rtPCR 的作用还包含基因表达定量分析，可变剪接研究，属于多用途分子检测技术。

问题 2 rtPCR 的作用和 qPCR 是完全一样吗

回答 2 rtPCR 的作用核心是逆转录扩增 RNA，qPCR 是实时荧光定量扩增，rtPCR 的作用可以和 qPCR 结合形成 RT qPCR，二者概念并不等同。

问题 3 rtPCR 的作用为什么需要先逆转录

回答 3 rtPCR 的作用检测对象是 RNA，PCR 聚合酶只能识别 DNA 模板，所以 rtPCR 的作用实现必须先逆转录，把 RNA 转换成 cDNA 之后才能进行后续 PCR 扩增。

【免责申明】

本文为分子生物学技术科普，rtPCR 属于专业实验室检测项目，检测结果解读需要由专业检验人员结合临床情况判断，本文内容仅供学习参考。